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原標題：GB/5009.17-2014食品安全國家標準食品中總汞及有機汞的測定
1、范圍
范本標準第一篇規定了食品中總汞的測定方法
本標準第一篇適用于食品中總汞的測定
本標準第二篇規定了食品中甲基汞含量測定的液相色譜-原子熒光光譜聯用方法(LC-AFS)
本標準第二篇適用于食品中甲基汞含量的測定
第一篇食品中總汞的測定
第一法原子熒光光譜分析法
2、原理
試樣經酸加熱消解后,在酸性介質中,試樣中汞被硼氫化鉀或硼氫化鈉還原成原子態汞,由載氣(氬氣)帶入原子化器中,在汞空心陰極燈照射下,基態汞原子被激發至高能態,在由高能態回到基態時,發射出特征波長的熒光,其熒光強度與汞含量成正比,與標準系列溶液比較定量。
3、試劑和材料
除非另有說明,本方法所用試劑均為優級純,水為GB/T6682規定的一級水。
3.1試劑
3.1.1硝酸(HNO3）
3.1.2過氧化氫(H2O2)。
3.1.3硫酸(H2SO4)。
3.1.4氫氧化鉀(KOH)。
3.1.5硼氫化鉀(KBH4):分析純。
3.2試劑配制
3.2.1硝酸溶液(1+9):量取50mL硝酸,緩緩加入450mL水中。
3.2.2硝酸溶液(5+95):量取5mL硝酸,緩緩加入95mL水中。
3.2.3氫氧化鉀溶液(5g/L):稱取5.0g氫氧化鉀,純水溶解并定容至1000mL,混勻。
3.2.4硼氫化鉀溶液(5g/L):稱取5.0g硼氫化鉀,用5g/L的氫氧化鉀溶液溶解并定容至1000mL,混勻。現用現配。
3.2.5重鉻酸鉀的硝酸溶液(0.5g/L):稱取0.05g重鉻酸鉀溶于100mL硝酸溶液(5+95)中。
3.2.6硝酸-高氯酸混合溶液(5+1):量取500mL硝酸,100mL高氯酸,混勻。
3.3標準品
氯化汞(HgCl2):純度≥99%。
3.4標準溶液配制
3.4.1汞標準儲備液(1.00mg/mL):淮確稱取0.1354g經干燥過的氯化汞,用重鉻酸鉀的硝酸溶液(0.5g/L)溶解并轉移至100mL容量瓶中,稀釋至刻度,混勻。此溶液濃度為1.00mg/mL。于4℃冰箱中避光保存,可保存2年。或購買經國家認證并授予標準物質證書的標準溶液物質。
3.4.2汞標準中間液(10g/mL):吸取1.00mL汞標準儲備液(1.00mg/mL)于100mL容量瓶中,用重鉻酸鉀的硝酸溶液(0.5g/L)稀釋至刻度,混勻,此溶液濃度為10g/mL。于4℃冰箱中避光保存,可保存2年。
3.4.3汞標準使用液(50ng/mL):吸取0.50mL汞標準中間液(10g/mL)于100mL容量瓶中,用0.5g/L重鉻酸鉀的硝酸溶液稀釋至刻度,混勻,此溶液濃度為50ng/mL,現用現配。
4、儀器和設備
注:玻璃器皿及聚四氟乙烯消解內罐均需以硝酸溶液(1+4)浸泡24h,用水反復沖洗,最后用去離子水沖洗干凈。
4.1原子熒光光譜儀。
4.2天平:感量為0.1mg和1mg
4.3微波消解系統
4.4壓力消解器
4.5恒溫干燥箱(50℃~300℃C)
4.6控溫電熱板(50℃~200℃)。
4.7超聲水浴箱
5分析步驟
5.1試樣預處理
5.1.1在采樣和制備過程中,應注意不使試樣污染。
5.1.2糧食、豆類等樣品去雜物后粉碎均勻,裝入潔凈聚乙烯瓶中,密封保存備用
5.1.3蔬菜、水果、魚類、肉類及蛋類等新鮮樣品,洗凈晾干,取可食部分勻漿,裝亼淸凈聚乙烯瓶中,密封,于4℃冰箱冷藏備用
5.2試樣消解
5.2.1壓力罐消解法
稱取固體試樣0.2g~1.0g(精確到0.001g),新鮮樣品0.5g~2.0g或液體試樣吸取1mL~5mL稱量(精確到0.001g),置于消解內罐中,加入5mL硝酸浸泡過夜。蓋好內蓋,旋緊不銹鋼外套,放入恒溫干燥箱,140℃~160℃保持4h~5h,在箱內自然冷卻至室溫,然后緩慢旋松不銹鋼外套,將消解內罐取出,用少量水沖洗內蓋,放在控溫電熱板上或超聲水浴箱中,于80℃或超聲脫氣2min~5min趕去棕色氣體。取岀消解內罐,將消化液轉移至25mL容量瓶中,用少量水分3次洗滌內罐,洗滌液合并于容量瓶中并定容至刻度,混勻備用;同時作空白試驗。
5.2.2微波消解法
稱取固體試樣0.2g~0.5g(精確到0.001g)、新鮮樣品0.2g~0.8g或液體試樣1mL~3mL于消解罐中,加入5mL~8mL硝酸,加蓋放置過夜,旋緊罐蓋,按照微波消解儀的標痄操作步驟進行消解(消解參考條件見附錄A表A.1)。冷卻后取出,緩慢打開罐蓋排氣,用少量水沖洗內蓋,將消解罐放在控溫電熱板上或超聲水浴箱中,于80℃加熱或超聲脫氣2min~5min,趕去棕色氣體,取出消解內罐將消化液轉移至25mL塑料容量瓶中,用少量水分3次洗滌內罐,洗滌液合并于容量瓶中并定容至刻度,混勻備用;同時作空白試驗。
5.2.3回流消解法
5.2.3.1糧食
稱取1.0g~4.0g(精確到0.001g)試樣,置于消化裝置錐形瓶中,加玻璃珠數粒,加45mL硝酸10mL硫酸,轉動錐形瓶防止局部炭化。裝上冷凝管后,小火加熱,待開始發泡即停止加熱,發泡停止后,加熱回流2h。如加熱過程中溶液變棕色,再加5mL硝酸,繼續回流2h,消解到樣品完全溶解般呈淡黃色或無色,放冷后從冷凝管上端小心加20mL水,繼續加熱回流10min放冷,用適量水沖洗冷凝管,沖洗液并入消化液中,將消化液經玻璃棉過濾于100mL容量瓶內,用少量水洗滌錐形瓶、濾器,洗滌液并入容量瓶內,加水至刻度,混勻。同時做空白試驗
5.2.3.2植物油及動物油脂
稱取1.0g~3.0g(精確到0.001g)試樣,置于消化裝置錐形瓶中,加玻璃珠數粒,加入7mL硫酸小心混勻至溶液顏色變為棕色,然后加40mL硝酸。以下按5.2.3.1“裝上冷凝管后,小火加熱……同時做空白試驗”步驟操作。
5.2.3.3薯類、豆制品
稱取1.0g~4.0g(精確到0.001g),置于消化裝置錐形瓶中,加玻璃珠數粒及30mL硝酸、5mL硫酸,轉動錐形瓶防止局部炭化。以下按5.2.3.1“裝上冷凝管后,小火加熱…豐……同時做空白試驗”步驟操作。
5.2.3.4肉、蛋類
稱取0.5g~2.0g(精確到0.001g),置于消化裝置錐形瓶中,加玻璃珠數粒及30mL硝酸、5mL硫酸、轉動錐形瓶防止局部炭化。以下按5.2.3.1“裝上冷凝管后,小火加熱…中…同時做空白試驗”步驟操作。
5.2.3.5乳及乳制品
稱取1.0g~4.0g(精確到0.001g)乳或乳制品,置于消化裝置錐形瓶中,加玻璃珠數粒及30mL硝酸,乳加10mL硫酸,乳制品加5mL硫酸,轉動錐形瓶防止局部炭化。以下按5.2.3.1“裝上冷凝管后火加熱…豐…同時做空白試驗”步驟操作。
5.3測定
5.3.1標準曲線制作
分別吸取50ng/mL汞標準使用液0.00mL、0.20ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml、2.50mL于50mL容量瓶中,用硝酸溶液(1十9)稀釋至刻度,混勻。各自相當于汞濃度為0.00ng/mL、0.20ng/mL、0.50ng/mL、1.00ng/mL、1.50ng/mL、2.00ng/mL、2.50ng/mL。
5.3.2試樣溶液的測定
設定好儀器最佳條件,連續用硝酸溶液(1+9)進樣,待讀數穩定之后,轉入標準系列測量,繪制標準曲線。轉入試樣測量,先用硝酸溶液(1+9)進樣,使讀數基本回零,再分別測定試樣空白和試樣消化液,每測不同的試樣前都應清洗進樣器。試樣測定結果按式(1)計算。
5.4儀器參考條件
光電倍增管負高壓:240V;汞空心陰極燈電流:30mA;原子化器溫度:300℃;載氣流速500mL/min;屏蔽氣流速:1000mL/min
6、分析結果的表述
試樣中汞含量按式(1)計算：
7、精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的20%。
8、其他
當樣品稱樣量為0.5g,定容體積為25mL時,方法檢出限0.003mg/kg,方法定量限0.010mg/kg。
第二法冷原子吸收光譜法
9、原理
汞蒸氣對波長253.7nm的共振線具有強烈的吸收作用。試樣經過酸消解或催化酸消解使汞轉為離子狀態,在強酸性介質中以氯化亞錫還原成元素汞,載氣將元素汞吹入汞測定儀,進行冷原子吸收測定,在一定濃度范圍其吸收值與汞含量成正比,外標法定量。
10、試劑和材料
注:除非另有說明,所用試劑均為優級純,水為GB/T6682規定的一級水。
10.1試劑
10.1.1硝酸(HNO3)。
10.1.2鹽酸(HCl)。
10.1.3過氧化氫(H2O2)(30%)。
10.1.4無水氯化鈣(CaCl2):分析純。
10.1.5高錳酸鉀(KMnO):分析純。
10.1.6重鉻酸鉀(K2Cr2O2):分析純。
10.1.7氯化亞錫(SnCl2·2H2O):分析純。
10.2試劑配制。
10.2.1高錳酸鉀溶液(50g/L):稱取5.0g高錳酸鉀置于100mL棕色瓶中,用水溶解并稀釋至100mL。
10.2.2硝酸溶液(5+95):量取5mL硝酸,緩緩倒入95mL水中,混勻。
10.2.3重鉻酸鉀的硝酸溶液(0.5g/L):稱取0.05g重鉻酸鉀溶于100mL硝酸溶液(5+95)中。
10.2.4氯化亞錫溶液(100g/L):稱取10g氯化亞錫溶于20mL鹽酸中,90℃水浴中加熱,輕微振蕩,待氯化亞錫溶解成透明狀后,冷卻,純水稀釋定容至100mL,加入幾粒金屬錫,置陰涼、避光處保存經發現渾濁應重新配制。
10.2.5硝酸溶液(1+9):量取50mL硝酸,緩緩加入450mL水中。
10.3標準品
氯化汞(HgCl2):純度≥99%。
10.4標準溶液配制
10.4.1汞標準儲備液(1.00mg/mL):準確稱取0.1354g干燥過的氯化汞,用重鉻酸鉀的硝酸溶液(0.5g/L)溶解并轉移至100mL容量瓶中,定容。此溶液濃度為1.00mg/mL。于4℃冰箱中避光保存,可保存兩年。或購買經國家認證并授予標準物質證書的標準溶液物質。
10.4.2汞標準中間液(10g/mL):吸取1.00mL汞標準儲備液(1.00mg/mL)于100mL容量瓶中,用重鉻酸鉀的硝酸溶液(0.5g/L)稀釋和定容。溶液濃度為10g/mL。于4℃冰箱中避光保存,可保存兩年。
10.4.3汞標準使用液(50ng/mL):吸取0.50mL汞標準中間液(10g/mL)于100mL容量瓶中,用重鉻酸鉀的硝酸溶液(0.5g/L)稀釋和定容。此溶液濃度為50ng/mL,現用現配。
11、儀器和設備
注:玻璃器皿及聚四氟乙烯消解內罐均需以硝酸溶液(1+4)浸泡24h,用水反復沖洗,最后用去離子水沖洗干凈。
11.1測汞儀(附氣體循環泵、氣體干燥裝置、汞蒸氣發生裝置及汞蒸氣吸收瓶),或全自動測汞儀。
11.2天平:感量為0.1mg和1mg。
11.3微波消解系統。
11.4壓力消解器。
11.5恒溫干燥箱(200℃~300℃)。
11.6控溫電熱板(50℃~200℃）。
11.7超聲水浴箱。
12、分析步驟
12.1試樣預處理
12.2試樣消解
12.2.1壓力罐消解法見5.2.1
12.2微波消解法見5.2.2
12.2.3回流消解法見5.2.3
12.3儀器參考條件
開測汞儀,預熱1h,并將儀器性能調至最佳狀態。
12.4標準曲線的制作
分別吸取汞標準使用液(50ng/mL)0.00mL、0.20mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL于50mL容量瓶中,用硝酸溶液(1+9)稀釋至刻度,混勻。各自相當于汞濃度為0.00ng/mL、0.20ng/mL、0.50ng/mL、1.00ng/ml、1.50ng/mL、2.00ng/ml和2.50ng/mL。將標準系列溶液分別置于測汞儀的汞蒸氣發生器中,連接抽氣裝置,沿壁迅速加入3.0mL還原劑氯化亞錫(100g/L),迅速蓋緊瓶塞,隨后有氣泡產生,立即通過流速為1.0L/min的氮氣或經活性炭處理的空氣,使汞蒸氣經過氯化鈣干燥管進入測汞儀中,從儀器讀數顯示的最高點測得其吸收值。然后,打開吸收瓶上的三通閥將產生的剩余汞蒸氣吸收于高錳酸鉀溶液(50g/L)中,待測汞儀上的讀數達到零點時進行下一次測定同時做空白試驗。求得吸光度值與汞質量關系的一元線性回歸方程。
12.5試樣溶液的測定
分別吸取樣液和試劑空白液各5.0mL置于測汞儀的汞蒸氣發生器的還原瓶中,以下按照12.4“連接抽氣裝置…中…同時做空白試驗”進行操作。將所測得吸光度值,代入標準系列溶液的一元線性回歸方程中求得試樣溶液中汞含量。
13、分析結果的表述
14、精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的20%。
15、其他
當樣品稱樣量為0.5g,定容體積為25mL時,方法檢出限為0.002mg/kg,方法定量限為0.007mg/kg。
第二篇食品中甲基汞的測定
液相色譜原子熒光光譜聯用方法
16、原理
食品中甲基汞經超聲波輔助5mol/L鹽酸溶液提取后,使用C18反相色譜柱分離,色譜流出液進入在線紫外消解系統,在紫外光照射下與強氧化劑過硫酸鉀反應,甲基汞轉變為無機汞。酸性環境下,無機汞與硼氫化鉀在線反應生成汞蒸氣,由原子熒光光譜儀測定。由保留時間定性,外標法峰面積定量。
17、試劑和材料
注:除非另有說明,本方法所用試劑均為優級純,水為GB/T6682規定的一級水。
17.1試劑
17.1.1甲醇(CHI3OH):色譜純。
17.1.2氫氧化鈉(NaOH）。
17.1.3氫氧化鉀(KOH)
17.1.4硼氫化鉀(KBH4):分析純
17.1.5過硫酸鉀(K2S2O3):分析純
17.1.6乙酸銨(CHI3COONH4):分析純
17.1.7鹽酸(HCl）。
17.1.8氨水(NH,O)L半胱氨酸(L-HSCH2CH(NH2)COOH):分析純
17.2試劑配制
17.2.1流動相(5%甲醇+0.06mol/L乙酸銨十0.1%L半胱氨酸):稱取0.5gL-半胱氨酸,2,2g乙酸銨,置于500mL容量瓶中,用水溶解,再加入25mL甲醇,最后用水定容至500mL。經0.45!m有機系濾膜過濾后,于超聲水浴中超聲脫氣30min。現用現配。
17.2.2鹽酸溶液(5mol/L):量取208mL鹽酸,溶于水并稀釋至500mL。
17.2.3鹽酸溶液10%(體積比):量取100mL鹽酸,溶于水并稀釋至1000mL
17.2.4氫氧化鉀溶液(5g/L):稱取5.0g氫氧化鉀,溶于水并稀釋至1000mL
17.2.5氫氧化鈉溶液(6mol/L):稱取24g氫氧化鈉,溶于水并稀釋至100mL
17.2.6硼氫化鉀溶液(2g/L):稱取2.0g硼氫化鉀,用氫氧化鉀溶液(5g/L)溶解并稀釋至1000mL，現用現配
17.2.7過硫酸鉀溶液(2g/L):稱取1.0g過硫酸鉀,用氫氧化鉀溶液(5g/L)溶解并稀釋至500mL，現用現配
17.2.8L-半胱氨酸溶液(10g/L):稱取0.1gL半胱氨酸,溶于10mL水中。現用現配
17.2.9甲醇溶液(1+1):量取甲醇100mL,加入100mL水中,混勻
17.3標準
17.3.1氯化汞(HgCl2),純度≥99%。
17.3.2氯化甲基汞(HgH3Cl),純度≥99%
17.4標準溶液配制
17.4.1氯化汞標準儲備液(200g/mL,以Hg計):準確稱取0.0270g氯化汞,用0.5g/L重鉻酸鉀的硝酸溶液溶解,并稀釋、定容至100ml。于4℃冰箱中避光保存,可保存兩年。或購買經國家認證并授予標準物質證書的標準溶液物質
17.4.2甲基汞標準儲備液(200g/mL,以Hg計):準確稱取0.0250g氯化甲基汞,加少量甲醇溶解用甲醇溶液(1+1)稀釋和定容至100mL。于4℃冰箱中避光保存,可保存兩年。或購買經國家認證并授予標準物質證書的標準溶液物質
17.4.3混合標準使用液(1.00!g/mL,以Hg計):準確移取0.50mL甲基汞標準儲備液和0.50mL氯化汞標準儲備液,置于100mL容量瓶中,以流動相稀釋至刻度,搖勻。此混合標準使用液中,兩種汞化合物的濃度均為1.00P4g/mL。現用現配
18、儀器和設備
注:玻璃器皿均需以硝酸溶液(1+4)浸泡24h,用水反復沖洗,最后用去離子水沖洗干凈
18.1液相色譜-原子熒光光譜聯用儀(LC-AFS):由液相色譜儀(包括液相色譜泵和手動進樣閥)、在線紫外消解系統及原子熒光光譜儀組成
18.2天平:感量為0.1mg和1.0mg
18.3組織勻漿器
18.4高速粉碎機
18.5冷凍干燥機
18.6離心機:最大轉速10000r/min
18.7超聲清洗器
19分析步驟
19.1試樣預處理
19.2試樣提取
稱取樣品0.50g~2.0g(精確至0.001g),置于15mL塑料離心管中,加入10mL的鹽酸溶液(5mol/L),放置過夜。室溫下超聲水浴提取60min,期間振搖數次。4℃下以8000r/min轉速離心15min。準確吸取2.0mL上清液至5mL容量瓶或刻度試管中,逐滴加入氫氧化鈉溶液(6mol/L),使樣液pH為2~7。加入0.1mL的L-半胱氨酸溶液(10g/L),最后用水定容至刻度。0.45tm有機系濾膜過濾,待測。同時做空白試驗。
注:滴加氫氧化鈉溶液(6mol/L)時應緩慢逐滴加入,避免酸堿中和產生的熱量來不及擴散,使溫度很快升高,導致汞化合物揮發,造成測定值偏低
19.3儀器參考條件
19.3.1液相色譜參考條件
液相色譜參考條件如下：
色譜柱:C18分析柱(柱長150mm,內徑4.6mm,粒徑5μm),C18預柱(柱長10mm,內徑4.6mm,粒徑5μm)。流速:1.0mL/min進樣體積:100μL
19.3.2原子熒光檢測參考條件
原子熒光檢測參考條件如下：
負高壓:300V
汞燈電流:30mA
原子化方式:冷原子
載液:10%鹽酸溶液;
載液流速:4.0mL/min
還原劑:2g/L硼氫化鉀溶液;
還原劑流速4.0mL/min
氧化劑:2g/L過硫酸鉀溶液,氧化劑流速1.6mL/min
載氣流速:500mL/min
輔助氣流速:600mL/min
19.4標準曲線制作
取5支10mL容量瓶,分別準確加入混合標準使用液(1.00g/mL)0.00mL、0.010mL、0.020mL、0.040mL、0.060mL和0.10mL,用流動相稀釋至刻度。此標準系列溶液的濃度分別為0.0ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/ml、4.0ng/mL、6.0ng/ml和10.0ng/mL。吸取標準系列溶液100gL進樣,以標準系列溶液中目標化合物的濃度為橫坐標,以色譜峰面積為縱坐標,繪制標準曲線。
試樣溶液的測定:將試樣溶液100μL注入液相色譜原子熒光光譜聯用儀中,得到色譜圖,以保留間定性。以外標法峰面積定量。平行測定次數不少于兩次。標準溶液及試樣溶液的色譜圖參見附錄B。
20、分析結果的表述
試樣中甲基汞含量按式(3)計算
21、精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的20%。
22、其它
當樣品稱樣量為1g,定容體積為10mL時,方法檢出限為0.008mg/kg,方法定量限為0.025mg/kg。
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